帶有經(jīng)驗證引物的all-in-One qPCR混合物提供通用的qPCR反應條件和可靠的定量PCR數(shù)據(jù)。聯(lián)合開發(fā)和共同優(yōu)化的一體化qPCR混合物和基因特異性引物提供了您所需的全部優(yōu)勢，而沒有您預期的任何高成本:

• 統(tǒng)一的反應條件減少了實驗設計時間，從而能夠更早提交期刊論文
• 即使是低拷貝基因也具有高擴增效率和靈敏度，這意味著每次都可以進行可靠的定量
• 不存在非特異性擴增*和引物二聚體*確保了數(shù)據(jù)的可再現(xiàn)性和可發(fā)布性

一體化qPCR混合物使用高保真熱啟動聚合酶、優(yōu)化的反應緩沖液和高質(zhì)量dNTPs，即使從低拷貝RNA（cDNA）或DNA物種中也能進行特異性和靈敏的擴增（圖1）。

圖一。使用一體化qPCR主混合物進行qPCR反應。使用GeneCopoeia全合一cDNA合成試劑盒對來自MCF-7細胞的1微克總RNA進行逆轉(zhuǎn)錄。將RT反應物稀釋至1毫克至1毫克RNA /升。使用GeneCopoeia All-in-One qPCR混合物（A）將1升稀釋的RT反應物用于隨后的qPCR中35個循環(huán)。最終產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠上進行電泳（B）。

放大曲線	熔化曲線	標準曲線

圖二。2X All-in-One qPCR混合物的擴增效率和檢測靈敏度通過標準曲線進行評估，該標準曲線由5×10的質(zhì)粒DNA梯度稀釋而成6到5個分子。擴增和解鏈曲線的峰值表明，使用All-in-One qPCR Mix可以獲得非常高的靈敏度，可以檢測低至5個分子。同時，每個濃度之間良好的線性關(guān)系也顯示了高擴增效率。

一體化qPCR驗證引物完成任務

使用GeneCopoeia的precision qPCR消除無休止的調(diào)整和優(yōu)化。只需添加多合一底漆并開始。一體式qPCR人-小鼠或大鼠特異性引物由專有算法設計并經(jīng)過驗證?精密性能。引物驗證包括解鏈曲線，以確保擴增正確的靶DNA（圖2）。

當與多合一SYBR結(jié)合使用時®Green qPCR Mix，多合一引物在定量PCR檢測中提供可靠且可重現(xiàn)的高性能。

放大曲線
熔化曲線	瓊脂糖凝膠電泳驗證結(jié)果

圖三。45對基因特異性All-in-One qPCR引物經(jīng)過實驗驗證，可產(chǎn)生單一解離曲線峰，并對目標基因產(chǎn)生正確大小的單一擴增。將包含來自10種不同人類組織（肺、肝、睪丸、卵巢、脾、腦、胎盤、胰腺、心臟和乳腺）的總RNA的逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的cDNA庫用作qPCR驗證模板。使用0.2 M引物和2X多合一qPCR混合物進行qPCR。將反應物孵育10分鐘。在95℃下，隨后在10秒內(nèi)進行40次95℃的循環(huán)。；60攝氏度20秒。72攝氏度15秒。使用Bio-Rad iQ5儀器。最后一個循環(huán)結(jié)束時，溫度從72℃升至95℃，形成一條熔化曲線。顯示了10個樣品的擴增曲線、解鏈曲線和瓊脂糖凝膠電泳（奇數(shù)泳道中陽性和偶數(shù)泳道中無模板對照（NTC）的驗證結(jié)果）。

*當一體式驗證PCR引物和PCR混合物一起使用時，確保非特異性擴增和引物二聚體的缺失。自動驗證適用于人類、小鼠和大鼠的引物。查詢其他物種的驗證。