傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)在蛋白質(zhì)互作和低豐度蛋白檢測(cè)方面能力受限。我們將流式細(xì)胞術(shù)與Duolink®鄰位連接技術(shù)（PLA）結(jié)合在一起，實(shí)現(xiàn)了蛋白互作流式分析。Duolink® flowPLA檢測(cè)試劑盒通過增強(qiáng)靈敏度可以檢測(cè)細(xì)胞群中的低豐度靶蛋白。該實(shí)驗(yàn)方案易于操作，可適配任意流式細(xì)胞儀來提供可直接發(fā)表的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

Duolink® flowPLA檢測(cè)試劑盒可進(jìn)行40次反應(yīng)，每次需100,000細(xì)胞溶于100 µL反應(yīng)液中。試劑盒組分包含：

1.連接原液(5X) – 稀釋配制1X連接緩沖液

2.連接酶(1 U/μL) – 添加配制連接液

3.擴(kuò)增原液(5X) – 稀釋配制1X擴(kuò)增緩沖液

4.聚合酶(10 U/μL) – 添加配制擴(kuò)增液

5.檢測(cè)原液(5X) – 稀釋配制1X檢測(cè)緩沖液

Duolink®鄰位連接檢測(cè)（PLA）實(shí)現(xiàn)了對(duì)內(nèi)源性蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）和翻譯后修飾的研究，為單一事件提供了可通過顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行可視化的熒光信號(hào)。為了實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)間相互作用的研究，Duolink® PLA技術(shù)使用了一對(duì)帶有寡核苷酸標(biāo)記的抗體，當(dāng)它們相距在40nm以內(nèi)時(shí)，可進(jìn)行滾圈擴(kuò)增并在添加標(biāo)記探針后產(chǎn)生特異性熒光信號(hào)。

Duolink® PLA可提供四種不同顏色的熒光用于流式細(xì)胞儀和顯微鏡檢測(cè)，對(duì)細(xì)胞中多組蛋白質(zhì)間的相互作用實(shí)現(xiàn)可視化。借助Duolink® PLA技術(shù)的放大能力和諸多優(yōu)勢(shì)，發(fā)現(xiàn)任何科研突破機(jī)會(huì)：

1.可視化蛋白互作——包括穩(wěn)定和瞬時(shí)兩種

2.可視化翻譯后修飾

3.檢測(cè)內(nèi)源蛋白——無需表達(dá)或遺傳操作

4.高特異性——使用兩種抗體/探針消除假陽(yáng)性

5.無需特殊設(shè)備——可提供基于標(biāo)準(zhǔn)免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)的方法